康寧基底膜基質(zhì)可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞，厚層凝膠法允許您在三位基質(zhì)內培養細胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養細胞。您的選擇基于您想要實(shí)現的最終結果，無(wú)論是細胞生長(cháng)、附著(zhù)還是分化。

薄層凝膠法

  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 將培養板放置在冰上，以 50 μl/cm2向生長(cháng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。

  3. 將培養板放置在 37 °C ，30 分鐘。

  4. 如果有必要的話(huà)，請在使用無(wú)血清培養基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養板現在可以使用了。

厚層凝膠法

  1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 將培養板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200 μl/cm2向生長(cháng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。

  3. 將培養板放置在 37°C，30 分鐘?，F在可以添加培養基了。細胞也可以培養在這一凝膠的頂部。

薄層包被法

  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 使用無(wú)血清培養基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的應用程序，您應該完成以經(jīng)驗為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。

  3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面。在室溫下培養 1 個(gè)小時(shí)。

  4. 吸出未結合的材料并使用無(wú)血清培養基輕柔地漂洗。培養板現在可以使用了。

細胞復蘇：

  康寧中性蛋白酶(貨號 354235)，康寧細胞復蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠實(shí)現將生長(cháng)在康寧基底膜基質(zhì)上的細胞最有效地復蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續培養，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

  因為康寧基底膜基質(zhì)在 10°C 以上會(huì )開(kāi)始凝膠化，所以極其重要的是康寧基底膜基質(zhì)和所有的進(jìn)入與康寧基底膜基質(zhì)接觸的培養皿或培養基都應該預冷。產(chǎn)品需要放置于冰上，并在 2oC-6oC 的冰箱中或者冷室中過(guò)夜融化，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。操作康寧 Matrigel matrix時(shí)，我們建議使用預冷的移液管、吸頭和管子。在實(shí)驗的全部過(guò)程中請保持康寧基底膜基質(zhì)處于冰上。

  康寧高濃度 Matrigel matrix 用于哪些實(shí)驗？

康寧高濃度的 Matrigel matrix matrix 可適用于體內應用研究，如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(cháng)。高蛋白濃度同時(shí)可使康寧 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

如何將康寧 Matrigel matrix 用于 3D 培養？

怎樣制作 3D 膠？

需要將細胞嵌入到康寧 Matrigel matrix 中嗎？

康寧高濃度的 Matrigel matrix 可適用于體內應用研究，如制備厚層包被用于 3D 細胞培養。細胞可以嵌在康寧 Matrigel matrix 中或者接種在康寧 Matrigel matrix 表面（覆蓋法）。

使用 Corning Matrigel matrix 時(shí)，需要將移液器吸頭和離心管預冷嗎？

是的。因為 Corning Matrigel matrix 在高于 10℃的條件下即會(huì )開(kāi)始成膠，我們推薦操作 Matrigel matrix 時(shí)使用預冷的移液管、吸頭和離心管。

Corning Matrigel matrix 會(huì )快速聚合嗎？

Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃時(shí)會(huì )快速聚合成膠。

什么情況下，需要使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix？

對于涉及顏色檢測的實(shí)驗，推薦使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix，如使用熒光染料或 Drabkins 法計數內皮細胞成管實(shí)驗。對于子宮內膜細胞培養，也需使用無(wú)酚紅 Corning Matrigel matrix。

此外，酚紅和非甾體雌激素結構類(lèi)似，有類(lèi)雌激素效應。在實(shí)驗動(dòng)物體內可能具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。

如何從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞？

推薦使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 來(lái)收獲培養在Matrigel matrix 中的細胞。

Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會(huì )損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續接種培養或進(jìn)行檢測的細胞，使用 Corning Dispase 不會(huì )產(chǎn)生損傷。此外，Corning Dispase 也可以用于組織分離。

對于代謝研究和 RNA 抽提，建議在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 進(jìn)行非酶反應的細胞收獲。因為 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，進(jìn)行RNA 分析時(shí)，應設一個(gè) Corning Matrigel matrix（不接種細胞）的對照組。

其它從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞的方法：

• 降低溫度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應用。

• 離心以破壞 Corning Matrigel matrix 結構。

1. Corning? Matrigel? matrix包被過(guò)的培養皿可以?xún)Υ娑嚅L(cháng)時(shí)間呢？

包被過(guò)的培養皿最好當天使用，具體情況取決于實(shí)驗目的。需要保存的情況下，可在37°C培養箱中最多存放7天。保存時(shí)Matrigel表面需要使用無(wú)血清培養基均勻覆蓋，保持濕潤。

2.  如何確定Corning? Matrigel? matrix的包被用量？

*其他常用培養器皿的有效培養面積可查看www.corning.com/lifescience

3. 哪些情況下應該選用薄膠？什么時(shí)候用厚膠呢？ 3D培養有哪些應用？

薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖。如原代細胞培養，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠；厚膠主要用于3D細胞培養，如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細血管樣結構（Ring Assay），以及進(jìn)行細胞侵襲實(shí)驗等；3D細胞培養實(shí)驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構，如生物組織等。

詳細信息請參閱Corning? Matrigel? matrix使用指導手冊。

4. 進(jìn)行內皮管形成實(shí)驗，應該選用多大濃度的Matrigel呢？

進(jìn)行該實(shí)驗，Matrigel最低濃度應不低于10mg/mL。

5. 所有的Corning? Matrigel? matrix 都可以用于人胚胎干細胞（hESC） 培養嗎?

不是的。Corning提供專(zhuān)門(mén)用于人胚胎干細胞（hESC）培養的Corning? Matrigel? matrix（貨號為 354277）。該產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量監控，可以保證hESC培養的一致性、可重復性和高度可靠性。在干細胞培養領(lǐng)域知名的STEMCELL Technologies公司，也正是選用此產(chǎn)品包被的培養板，用于生產(chǎn)其mTeSR?1產(chǎn)品。hESC在mTeSR1培養體系中可以維持未分化狀態(tài)，保持標準形態(tài)并正常表達表面標志物。

此外，Corning BioCoat? Matrigel matrix提供預包被產(chǎn)品，如預包被的6孔板（貨號354671）。該系列產(chǎn)品不同批次間的Matrigel包被濃度一致，方便用戶(hù)使用；用于hESC培養，可以維持干細胞應有的自我更新能力和多能性。如果使用非專(zhuān)門(mén)用于hESC培養的Corning? Matrigel? matrix培養hESC，細胞培養效果可能不理想，不推薦用戶(hù)使用。

6. 做細胞侵襲實(shí)驗，需要使用多少Corning? Matrigel? matrix進(jìn)行包被？

包被24孔通透性支持物，推薦每孔使用0.1 mL (濃度200-300 μg/mL) ，Corning?Matrigel? matrix貨號為354234, 354230 。

7. Corning? Matrigel? matrix的最低成膠濃度是多少？

不同的實(shí)驗目的需要不同的Matrigel濃度，用戶(hù)應該根據具體的實(shí)驗需求確定。Corning?Matrigel? matrix最低成膠濃度為 3 mg/mL。稀釋時(shí)不要簡(jiǎn)單進(jìn)行體積倍比稀釋?zhuān)煌伍g的Matrigel濃度有差異，應該根據最終工作濃度 (mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無(wú)血清培養基）的量。用于體內研究的Matrigel，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應低于 4 mg/mL。

8. Corning? Matrigel? matrix膠塊在體內可以維持多長(cháng)時(shí)間？

基質(zhì)膠膠塊可以在體內維持至少一周的時(shí)間。

9. 怎樣稀釋Corning? Matrigel? matrix?

使用冰上預冷的無(wú)血清培養基或者PH 7.4的PBS。

10. 應該如何對Corning? Matrigel? matrix移液操作?

推薦使用預冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時(shí)不要觸及瓶子底部；分液時(shí)切忌過(guò)快、用力過(guò)猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時(shí)，應該吸取6mL，分液到移液管內仍有1mL時(shí)即停止；如果使用自動(dòng)移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進(jìn)行分液。

11. 為什么我的Corning? Matrigel? matrix很粘稠？

基質(zhì)膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0 mg/mL，基質(zhì)膠會(huì )顯得非常厚重。Corning? Matrigel? matrix基質(zhì)膠產(chǎn)品在未稀釋前都會(huì )比較粘稠。粘稠的高濃度Corning? Matrigel? matrix(Corning? Matrigel? matrix HC)不稀釋也可以直接使用，如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內后，細胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標準濃度的Corning? Matrigel?matrix產(chǎn)品使用方法使用，具體稀釋濃度根據實(shí)驗需求確定。

除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過(guò)程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個(gè)運輸過(guò)程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏Corning? Matrigel? matrix的冰箱帶有自動(dòng)除霜功能，冰箱除霜過(guò)程中升溫，可能使基質(zhì)膠成膠。所以，切忌將Corning?Matrigel? matrix儲藏于此類(lèi)冰箱中。為保證Corning? Matrigel? matrix的使用效果，凍融次數應該盡可能減少。拿到新的Corning? Matrigel? matrix后，請按照單次用量進(jìn)行分裝。每次融化操作，Matrigel基質(zhì)膠都應該放置于冰上。如果Matrigel基質(zhì)膠在成膠狀態(tài)被凍住，再次融化時(shí)將不能成恢復液體。

12. Corning? Matrigel? matrix可以誘導ES/iPS細胞分化嗎？

可以的，已經(jīng)有相關(guān)文章表明 Corning? Matrigel? matrix可以用于ES/iPS細胞的分化研究。

13. 為什么Corning? Matrigel? matrix在37°C成膠，而在4°C時(shí)卻呈液體狀態(tài)？

Corning? Matrigel? matrix是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜， 新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原, 巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長(cháng)因子、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子及其他生長(cháng)因子。這些蛋白構成了Matrigel的基本結構。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價(jià)鍵可以結合，促使Matrigel形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒(méi)有足夠的能量促使共價(jià)鍵結合，所以Matrigel呈現液體狀態(tài)。

Matrigel matrix丨康寧基質(zhì)膠使用指南-2